近年來大量研究表明，免疫功能紊亂是老年人易患感染、腫瘤等老年病的重要原因〔1，2〕。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，腎氣虧虛是老年性病變的內(nèi)在根據(jù)，氣血虛弱是老年性病變的重要因素，腎虛與老年病關(guān)系密切。我們以益氣補腎方治療老年氣虛腎虛證患者并測定與之相關(guān)的多項免疫指標(biāo)，并與對照組進(jìn)行比較，旨在觀察老年氣虛腎虛證患者的免疫功能狀況及益氣補腎方對其調(diào)節(jié)作用。

　　目的：觀察老年氣虛腎虛證患者的免疫功能狀況及益氣補腎方對其的調(diào)節(jié)作用。方法：60例老年氣虛腎虛患者被隨機分為兩組，治療組和對照組各30例，治療組以益氣補腎方治療，療程30 d，檢測T淋巴細(xì)胞亞群、自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)、B細(xì)胞、免疫球蛋白、補體、淋巴細(xì)胞非組蛋白圖像分析(Ag�睳ors)等免疫指標(biāo)于用藥前后的表達(dá)情況，與對照組進(jìn)行比較。結(jié)果：益氣補腎方能顯著提高老年氣虛腎虛證患者的CD3、CD4、CD4/CD8值，提高NK細(xì)胞、Ag�睳ors水平，對免疫球蛋白、補體、B細(xì)胞無明顯影響。結(jié)論：益氣補腎方對與老年氣虛腎虛證相關(guān)的免疫紊亂有較好的調(diào)節(jié)作用，尤其是細(xì)胞免疫，對體液免疫無明顯影響。

　　1 對象與方法

　　1��1 對象 本研究入選病例共60例，均為2004年11月～2005年5月解放軍總醫(yī)院中醫(yī)科高干門診患者。其中男51例、女9例；年齡61～83(73��12±4��54)歲；包括高血壓、冠心病17例，房顫5例，腦梗死11例，糖尿病11例，惡性腫瘤5例，輕度腎功能不全5例，白細(xì)胞減少癥3例，帕金森綜合征3例。

　　1��2 病例選擇標(biāo)準(zhǔn)

　　1��2��1 納入標(biāo)準(zhǔn) 根據(jù)中華人民共和國衛(wèi)生部頒布的《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》〔3〕和《中醫(yī)虛證辨證參考標(biāo)準(zhǔn)》〔4〕中關(guān)于氣虛、腎虛的診斷標(biāo)準(zhǔn)。年齡在60歲以上，男女不限；符合以下氣虛和腎虛的主癥各3項以上。氣虛主癥：神疲乏力、氣短、懶言、自汗。腎虛主癥：腰膝酸軟、足跟痛、耳鳴耳聾、尿后余瀝。舌象、脈象單獨記錄，未列入主證之中。

　　1��2��2 排除標(biāo)準(zhǔn) 不符合“氣虛、腎虛”證診斷標(biāo)準(zhǔn)；不能按要求服藥、復(fù)診并完成療程者；有免疫系統(tǒng)疾病患者；合并肝腎、造血系統(tǒng)等嚴(yán)重原發(fā)性疾病及精神病患者；病情危重，難以對藥物的有效性和安全性作出正確評價者。

　　1��3 分組方法 采用完全隨機設(shè)計方法，分為治療組、對照組2組，各30例，除西藥治療外，治療組服用益氣補腎方治療，對照組不服用中藥治療。兩組患者在年齡、性別、病種、西藥治療方面保持均衡，統(tǒng)計學(xué)無顯著差異。完全隨機法：先將信封依次編為1至60號，然后從隨機化分組表上抄錄60個隨機數(shù)字。令隨機數(shù)字的單數(shù)代表甲組，雙數(shù)(0也作為雙數(shù))代表乙組。將確定的組別寫在信封上，患者就診時隨機挑選信封入組。

　　1��4 藥物制備及給藥方法

　　1��4��1 益氣補腎方制備 由解放軍總醫(yī)院中藥房提供中草藥，藥物組成為生黃芪、女貞子、肉蓯蓉、黃精等，由解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院中藥制劑室水提噴霧干燥制粒。

　　1��4��2 給藥方法 所有觀察病例保持西藥治療基本穩(wěn)定，并于治療前1個月停服一切治療本病的其他中藥。治療組服用自制中藥，對照組不服用任何中藥治療。治療組每日早、晚2次空腹口服，每次2袋，療程30 d。

　　1��5 試驗所用主要試劑、儀器及方法

　　1��5��1 T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞、B細(xì)胞 應(yīng)用美國Becton Dickion公司生產(chǎn)的FACSort Calibur型流式細(xì)胞儀及試劑IgGγ1�睩ITC/IgGγ2a�睵E，CD3�睩ITC /CD4�睵E，CD3�睩ITC /CD8�睵E，CD3�睩ITC /CD19�睵E，CD3�睩ITC /CD56+16�睵E,FACS Lysing Solution溶血素。將細(xì)胞染色30 min，溶血10 min，3 000 r/min離心5 min棄上清，PBS洗兩次，上機檢測。運行Cellquest軟件，進(jìn)行樣品測定分析。

　　1��5��2 免疫球蛋白、補體 應(yīng)用免疫比濁法。用抗人免疫球蛋白抗體、抗人補體C3、C4抗體和樣品中免疫球蛋白、補體C3、C4相結(jié)合，利用動力學(xué)原理觀察單位時間內(nèi)抗原與抗體結(jié)合的量來測定其濃度。采集的容器是一次性含分離膠的真空采血管，血液標(biāo)本必需添加劑是分離膠。將編好號的試管，以3 000 r/min離心3 min，取出標(biāo)本后去掉蓋子，Beckman公司的IMMAGE特種蛋白分析儀將編好號的試管加入試管架的規(guī)定位置，放在儀器相應(yīng)的標(biāo)本位置，上機檢測，運行軟件進(jìn)行樣品測定分析。

　　1��5��3 Ag�睳ORs 應(yīng)用北京健爾康公司生產(chǎn)的KL型腫瘤免疫圖像分析儀及RPMI1640培養(yǎng)液，GIBCO產(chǎn)品，銀染液(5%硝酸銀)、固定液及其他配套試劑。在無菌條件下取0��5 ml抗凝血加到含RPMI1640培養(yǎng)液的瓶中，置37℃培養(yǎng)箱中72 h后，加2滴終止液，繼續(xù)培養(yǎng)2 h后取出。將培養(yǎng)的細(xì)胞懸液輕輕混勻并吸到5 ml離心管中，1 000 r/min離心10 min；棄上清液后加入5 ml低滲液，混勻置37℃ 20 min；加5 ml固定液，混勻、離心后棄上清，重復(fù)1次；沉淀中加0��3 ml固定液，取2～3滴于預(yù)冷的玻片上，晾干。90℃水浴箱上置鋁板，玻片置其上，熱后加染液A 4滴，染液B 2滴，蓋玻片，涂片成深黃色時取下，凈水沖凈，自然晾干。將染片置于顯微鏡載物臺上，對焦，啟動分析程序。計算30個T淋巴細(xì)胞核仁銀染面積與細(xì)胞核面積比值。

　　1��6 統(tǒng)計學(xué)處理 數(shù)據(jù)采用STATA7��0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計分析。所有試驗指標(biāo)中的計量資料均用x±s表示，計量資料采用t檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗。

　　2 結(jié)果

　　2��1 對老年氣虛腎虛證患者T淋巴細(xì)胞亞群的影響 老年氣虛腎虛證患者在治療前CD3低于健康人群參考區(qū)間，CD4、CD8、CD4/CD8在健康人群參考區(qū)間之內(nèi)，但CD4處于低限水平。應(yīng)用益氣補腎方治療后CD3、CD4亞群較治療前有明顯提高(P＜0��05)，CD8有上升趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)差異，CD4/CD8較治療前有明顯提高(P＜0��05)，治療后治療組CD3、CD4、CD4/CD8值明顯高于對照組(P＜0��05)，對照組治療前后無明顯變化(P＞0��05)，見表1。

　　2��2 對老年氣虛腎虛證患者NK細(xì)胞、B細(xì)胞和Ag�睳ors的影響 老年氣虛腎虛證患者NK、B細(xì)胞和Ag�睳ors水平都在正常健康人群參考區(qū)間之內(nèi)，Ag�睳ors和NK細(xì)胞處于低限水平，通過益氣補腎方治療Ag�睳ors和NK細(xì)胞表達(dá)明顯提高(P＜0��05)，B細(xì)胞水平有上升趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0��05)。治療后治療組Ag�睳ors和NK細(xì)胞明顯高于空白對照組(P＜0��05)，對照組治療前后無明顯變化(P＞0��05)，見表1。

　　2��3 對老年氣虛腎虛證患者免疫球蛋白和補體的影響 老年氣虛腎虛證患者IgA 、IgG 、IgM及補體C3、C4水平都在正常健康人群參考區(qū)間之內(nèi)。通過益氣補腎方治療IgA 、IgG 、IgM及補體C3、C4水平較治療前均有所下降，但均無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0��05)。對照組治療前后無明顯差異，見表2。

　　表1 治療前后T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞、B 細(xì)胞測定結(jié)果（略）

　　與治療前比較:1)P＜0��05;與對照組比較:2)P＜0��05

　　表2 治療前后免疫球蛋白IgA 、IgG 、IgM和補體C3、C4測定結(jié)果（略）

　　與治療前比較: 均P＞0��05

　　3 討論

　　中醫(yī)學(xué)認(rèn)為衰老的原因在于五臟虛損,其中重要的機制在于腎精虧虛。隨增齡人的五臟功能逐漸虛減，導(dǎo)致后天臟腑之精不斷虛衰，臟腑功能的減退，后天臟腑之精的虛衰是腎精虧虛的直接因素。益氣補腎方由生黃芪、女貞子、肉蓯蓉、黃精等組成，方中生黃芪為補氣之代表藥，為補藥之長，對人體的氣血陰陽能兼而調(diào)之。女貞子、肉蓯蓉，黃精與生黃芪配伍共奏補益肝腎、調(diào)達(dá)氣血之功，使氣血雙補、陰陽兼顧，諸臟虛損得平。

　　本研究證實老年氣虛腎虛證患者的免疫紊亂主要表現(xiàn)為細(xì)胞免疫功能顯著下降，這與國內(nèi)文獻(xiàn)報道相符〔5〕，其中T細(xì)胞亞群、T細(xì)胞活化功能等均發(fā)生了顯著改變，CD3、CD4、CD4/CD8、Ag�睳ors均有所減低。應(yīng)用益氣補腎方治療后CD3、CD4、CD4/CD8、Ag�睳ors較治療前均有明顯提高(P＜0��05)。非特異性免疫也有所減低，表現(xiàn)為NK細(xì)胞水平較低，通過益氣補腎方治療NK細(xì)胞表達(dá)明顯提高(P＜0��05)，這與許得盛〔6〕報道一致。體液免疫變化不明顯，經(jīng)檢測老年氣虛腎虛證患者IgA 、IgG 、IgM、補體C3、C4及B細(xì)胞水平都在正常健康人群參考區(qū)間之內(nèi)。通過益氣補腎方治療IgA 、IgG、IgM及補體C3、C4水平較治療前均有所下降，B細(xì)胞水平有所提高，但均無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0��05)，這與張戰(zhàn)平報道〔7〕不同，可能與樣本數(shù)量及采集人群不同有關(guān)，有待深入研究。

　　本研究揭示了益氣補腎方對老年氣虛腎虛證相關(guān)免疫功能紊亂的部分作用機理，更深層次的機制有待進(jìn)一步的探討。

　　參考來源：《中國老年學(xué)雜志》2006年5月26卷5期；《益氣補腎方對老年氣虛腎虛證患者免疫功能的影響》；呼健 楊明會 路軍章

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