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【摘要】目的 探討無(wú)精子因子(AZF)微缺失與男性不育癥之間的關(guān)系。方法 隨機(jī)檢測(cè)來(lái)筆者所在醫(yī)院就診男性不育患者51例及20例正常生育史男性的AZF基因，并要求先了解相關(guān)精液特征，根據(jù)精液特征將患者分為無(wú)精子癥30例、嚴(yán)重少精子癥及少精子癥21例兩組；分別比較兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組AZF基因微缺失檢出率。結(jié)果 51例不育男性中檢測(cè)出Y染色體AZF微缺失7例，其中30例無(wú)精子癥組檢測(cè)出Y染色體AZF微缺失5例，21例嚴(yán)重少精子癥及少精子癥組檢測(cè)出Y染色體AZF微缺失2例。正常對(duì)照組均未見(jiàn)Y染色體AZF微缺失。結(jié)論AZF微缺失的檢測(cè)對(duì)原發(fā)性男性不育具有重要的臨床指導(dǎo)意義，值得臨床推廣應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】男性不育；無(wú)精子因子

根據(jù)有關(guān)統(tǒng)計(jì)學(xué)資料，在我國(guó)正常家庭，不孕不育問(wèn)題中有40%左右系男方問(wèn)題。筆者通過(guò)對(duì)51例男性不育患者進(jìn)行無(wú)精子因子(AZF)檢測(cè)，探討排除合并其他男性疾病后，原發(fā)性無(wú)精及少弱精癥患者與AZF微缺失的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)抽取2010年11月~2012年4月來(lái)筆者所在醫(yī)院就診的男性不育患者51例，年齡24~39歲，平均(29.5±6.3)歲。其中精液經(jīng)離心沉淀后，連續(xù)2次顯微鏡檢查常規(guī)精液均未發(fā)現(xiàn)精子者(無(wú)精子癥)30例；連續(xù)兩次常規(guī)精液分析精子密度均＜5×10⁶/mL或a級(jí)＜5%(嚴(yán)重少精子癥)及連續(xù)2次常規(guī)精液分析精子密度均為＜20×10⁶/mL(少精子癥)者21例，分別分為無(wú)精子癥組和嚴(yán)重少精子癥及少精子癥組。并排除合并其他男科疾病。另選擇20例正常生育史男性健康志愿者作為對(duì)照組，年齡26~37歲，平均(30.7±4.4)歲。兩組患者在性別、年齡等一般資料比較(P＞0.05)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。

1.2 AZF檢測(cè)方法

抽取受試者外周血3 mL，EDTA-K2抗凝后嚴(yán)格按照DNA提取試劑盒(HQ&Q Blood DNA Kit，安徽優(yōu)晶生物工程有限公司)說(shuō)明提取DNA。再進(jìn)行多重PCR擴(kuò)增，以性別決定基因SRY作為內(nèi)參照，每個(gè)AZF區(qū)域設(shè)置2個(gè)序列標(biāo)簽位點(diǎn)(sequence tagged sites，STS)，AZFa為SY84、SY86；AZFb為SY127、SY134；AZFc為SY254、SY255。所有DNA樣品均經(jīng)2次多重PCR完成，稱(chēng)為Multiplex A和B，每次多重PCR均包括AZFa、b、e區(qū)域的STS和對(duì)照基因引物。在Multiplex A中完成SRY、SY254、SY127、SY86的擴(kuò)增；在Multiplex B完成SRY、SY134、SY84、SY255的擴(kuò)增。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)3.0%瓊脂糖凝膠電泳(恒壓130 V)40 min，用GEL Doc2000凝膠成像系統(tǒng)進(jìn)行DNA電泳條帶的觀察。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料用(x(-)±s)的形式表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用χ²檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組與AZF微缺失概況比較

51例不育患者中AZF基因微缺失7例，無(wú)精子癥組有2例AZFa缺失，1例AZFa+AZFb+AZFc缺失，1例AZFb+AZFc缺失，1例AZFb缺失；嚴(yán)重少精子癥及少精子癥組有2例AZFc缺失。總體AZF微缺失檢出率13.7%。

2.2 AZF基因微缺失與精子密度的關(guān)系

30例無(wú)精子癥患者中Y染色體AZF微缺失5例，在無(wú)精子癥患者中AZF微缺失檢出率16.7%；21例嚴(yán)重少精子癥及少精子癥患者中AZF微缺失2例，檢出率9.5%，對(duì)照組未檢出AZF微缺失。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示各組間AZF微缺失率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表1。

3 討論

據(jù)有關(guān)研究表明，有多種原因均可引起男性生精障礙，其中有近30%的患者原因不明，即排除其他男性疾病后引起的生精障礙，稱(chēng)為原發(fā)性不育，其中10%~15%的無(wú)精子癥和5%~10%的嚴(yán)重少精子癥及少精子癥由Y染色體上AZF的微缺失造成。

目前AZF微缺失的篩選在我國(guó)尚處于新興階段，對(duì)嚴(yán)重少弱精子癥和無(wú)精子癥的臨床指導(dǎo)意義卻難以估量，具體表現(xiàn)為：(1)通過(guò)檢查可以明確“原因不明”的不育患者的病因，減少無(wú)謂的“治療”，以達(dá)到節(jié)約醫(yī)療資源及患者治療少花費(fèi)的目的，有利于社會(huì)和個(gè)人；(2)如果該類(lèi)患者想以輔助生育技術(shù)達(dá)到生育目的，那么有必要對(duì)患者告知的是，其后代也存在著不育的可能，具體說(shuō)來(lái)，即對(duì)于Y染色體上的AZF微缺失，可以很大程度上從父代傳給子代，最有可能的后果是致使子代不育。一般說(shuō)來(lái)，傳統(tǒng)診斷手段中Y染色體培養(yǎng)過(guò)于耗時(shí)，并且不能區(qū)分具體位點(diǎn)的缺失，不利于臨床治療和診斷。所以筆者運(yùn)用多重PCR技術(shù)檢測(cè)Y染色體AZF基因家族AZFa、AZFb、AZFc3個(gè)區(qū)域中6個(gè)序列標(biāo)簽位點(diǎn)微缺失。本技術(shù)簡(jiǎn)便、快速，較之傳統(tǒng)診斷方法節(jié)約時(shí)間，對(duì)患者損傷小。還可以避免因誤診帶來(lái)的不必要的藥物及手術(shù)治療，為男性不育患者的診斷、治療節(jié)省相當(dāng)大的費(fèi)用且可以提供有力的科學(xué)依據(jù)，值得臨床推廣應(yīng)用。

(張文林，鄧江錦，無(wú)精子因子微缺失與男性不育的臨床研究[J]中國(guó)醫(yī)藥科學(xué)2012年7月第2卷第14期：234、236)

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