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劉奇

224000 江蘇射陽(yáng)縣陳洋中心衛(wèi)生院

(中國(guó)社區(qū)醫(yī)師·醫(yī)學(xué)專業(yè)2012年第22期(第14卷總第319期)：300)

【摘要】目的：探討陰道分泌物常規(guī)檢查與PCR方法與效果。方法：收治細(xì)菌性陰道炎患者60例(觀察組)，同期選擇健康成年婦女60年(對(duì)照組)，取陰道分泌物后都進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)鏡檢與PCR檢驗(yàn)。結(jié)果：對(duì)照組的乳酸桿菌直接菌落計(jì)數(shù)平均1.62×10⁷，觀察組的乳酸桿菌直接菌落計(jì)數(shù)平均1.25×10⁴。同時(shí)PCR得灰度值與培養(yǎng)的茵數(shù)值之間明顯相關(guān)。結(jié)論：陰道分泌物常規(guī)檢查配合PCR檢查能夠有效發(fā)現(xiàn)疾病，方法特異、快速、簡(jiǎn)便。

【關(guān)鍵詞】陰道分泌物；細(xì)菌性陰道炎；鏡檢PCR

陰道的正常微生物群在維持陰道的酸性環(huán)境，預(yù)防感染等方面起著非常重要的作用。常狀態(tài)下，陰道內(nèi)存在的多種微生物相互影響、相互制約，形成一個(gè)動(dòng)態(tài)的平衡系統(tǒng)，而乳酸桿菌是其中最重要、數(shù)量最多的菌群。近年來(lái)隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展及廣泛應(yīng)用，PCR方法在細(xì)菌定量方面的研究越來(lái)越多，與傳統(tǒng)方法相比在準(zhǔn)確性和速度上都有了很大的提高。本文為此具體探討了陰道分泌物常規(guī)檢查與PCR方法與效果。

資料與方法

2008年2月~2012年2月收治細(xì)菌性陰道炎患者60例(觀察組)，年齡30~41歲，經(jīng)臨床及電鏡檢查確診為細(xì)菌性陰道炎；同期選擇健康成年婦女60例(對(duì)照組)，年齡30~41歲。

常規(guī)檢測(cè)：用無(wú)菌棉拭子采集陰道分泌物后，快速放入無(wú)菌試管，將0.1g陰道分泌物標(biāo)本立即加入9mL無(wú)菌稀釋液作連續(xù)10倍稀釋，取各稀釋梯度被檢液涂在BL培養(yǎng)基平皿中，在37℃ 10%CO₂條件下，孵育48小時(shí)，計(jì)數(shù)。肉眼觀察菌落特征，用革蘭氏染色法觀察細(xì)菌形態(tài)特點(diǎn)。

PCR檢測(cè)：登陸GenBank，查找乳酸桿菌16sRNA的特異性序列，設(shè)計(jì)引物LbLMA正方向兩條引物，引物具有乳酸桿菌屬的特異性序列，該引物靶向16sRNA擴(kuò)增約220bp。取處理好的乳酸桿菌純培養(yǎng)菌液2μL，加入23：1的PCR混合液中。94℃ 15秒，94℃ 3秒，55℃ 10秒，74℃ 35秒，35個(gè)循環(huán)，74℃ 2分鐘，45℃ 2秒。PCR擴(kuò)增后用10μLPCR產(chǎn)物作2%的瓊脂糖凝膠電泳，得到5個(gè)梯度的亮帶，每個(gè)濃度作3次平行重復(fù)，用凝膠成像分析系統(tǒng)測(cè)定其標(biāo)準(zhǔn)灰度值。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：使用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件，P＜0.05代表差異有顯著性。

結(jié)果

常規(guī)檢測(cè)結(jié)果：通過(guò)鏡檢，乳酸桿菌的菌落為圓形、隆起，周邊整齊光滑，無(wú)色、半透明。菌體呈革蘭陽(yáng)性、無(wú)芽孢、細(xì)長(zhǎng)有彎曲的桿菌，菌體可呈球桿狀或桿狀，排列成柵或鏈狀。對(duì)照組的乳酸桿菌直接菌落計(jì)數(shù)平均1.62×10⁷，觀察組的乳酸桿菌直接菌落計(jì)數(shù)平均1.25×10⁴。

PCR檢測(cè)結(jié)果：經(jīng)過(guò)PCR分析，對(duì)照組PCR檢測(cè)的平均灰度值856.2，觀察組46.2。同時(shí)PCR得灰度值與培養(yǎng)的菌數(shù)值之間明顯相關(guān)。

討論

陰道是人體的四大菌庫(kù)之一，細(xì)菌性陰道病時(shí)，表現(xiàn)為占優(yōu)勢(shì)的乳酸菌群被陰道加德納菌、厭氧菌和人型支原體等取代。乳酸桿菌是女性陰道的優(yōu)勢(shì)菌群，其發(fā)酵產(chǎn)酸是導(dǎo)致健康成年婦女陰道內(nèi)的pH值通常低于4.5的主要原因。健康婦女陰道內(nèi)可有一種或幾種乳酸桿菌，產(chǎn)生的過(guò)氧化氧，是正常陰道生態(tài)系統(tǒng)的一個(gè)非特異性的抗生保護(hù)劑。婦女陰道內(nèi)的乳酸桿菌對(duì)健康是非常有益的，而當(dāng)乳酸桿菌減少時(shí)，會(huì)造成菌群失調(diào)，導(dǎo)致細(xì)菌性陰道炎的發(fā)生。因此，能夠快速地檢測(cè)陰道中乳酸桿菌的數(shù)量，對(duì)了解婦女陰道的微生態(tài)環(huán)境，指導(dǎo)臨床治療是至關(guān)重要的。

PCR技術(shù)的應(yīng)用，使得針對(duì)細(xì)菌鑒定及定量的研究發(fā)展到了基因水平。PCR法可檢測(cè)原位菌數(shù)，通過(guò)設(shè)計(jì)屬特異性引物，能夠檢測(cè)到不能被培養(yǎng)的和已死的細(xì)菌，而不需要繁瑣的培養(yǎng)富集。本組試驗(yàn)結(jié)果顯示，健康婦女陰道分泌物中的乳酸桿菌含量一般10⁶~10⁸，而細(xì)菌性陰道炎患者陰道分泌物中的乳酸桿菌含量明顯減少，含量一般＜10⁵。同時(shí)利用標(biāo)本灰度值計(jì)算所得的結(jié)果與培養(yǎng)計(jì)算的結(jié)果之間明顯相關(guān)，并PCR法所得的灰度值與培養(yǎng)計(jì)算的結(jié)果之間也存在明顯相關(guān)性。

總之，陰道分泌物常規(guī)檢查配合PCR檢查能夠有效發(fā)現(xiàn)疾病，方法特異、快速、簡(jiǎn)便，值得在檢驗(yàn)中推廣應(yīng)用。

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